环境学院博士研究生 何发林

“叮咚”一声，手机响了，我满怀激动地点进了生科平台激光共聚焦共享微信群，眼疾手快地填入了姓名、学号、课题组PI、样品类型等信息。终于要在毕业之前用上激光共聚焦显微镜了，开心和激动的心情涌上心头。

在周末时，我就将培训视频中的操作部分反复观看学习，掌握了其中要领。今天上午，郭玉玉老师的讲解更加深了我对显微镜操作的印象。进入房间后，我们要首先查看温湿度和清理抽湿机的水箱，保证房间处在合适的实验条件下；随后要按照开机顺序依次打开总开关、显微镜组件电源开关、顺时针旋转激光器钥匙、金属卤化物灯电源、电动载物台开关、Power Supply开关和电脑主机开关。等待仪器连接后，我们就可以根据自己的实验需求，先用明场找到细胞，然后选择合适的激光器并调整仪器参数。一切准备就绪，点击“snap”就可以获得一张由不同颜色组成的细胞图片，那就是说，假设我使用了三种荧光染料，就会获得一张由三种颜色重叠组成的细胞图。

下午是进行自主练习的时间，可以选择用老师提供的样片，也可以自己携带样品操作，老师会进行单独指导。不同的样品有不同的拍摄技巧，比如原生质体非常小巧，寻找焦平面时就要格外注意，一不小心就找不到了。而我们组的细胞浓度较低，也很容易找不到焦平面。因此，调节显微镜的粗准焦螺旋时就要缓慢调整，对任何可疑的焦平面都要用细准焦螺旋反复调整、仔细鉴别。

由于细胞的特殊性，我们在实验时遇到了很多问题，比如常见染料使用的激发波长与细胞的自发荧光有重叠，在挑选染料时就要考虑是否满足实验条件。在进行实验前，我们非常紧张，一方面染料数量稀少、价格昂贵，另一方面即使做了多方面的考量，我们仍然担心实验会出现纰漏。最终，我们选用了激发波长为620 nm的染料进行实验。缓慢调整细准焦螺旋，视野中出现了圆圆的可爱的细胞。此时我们的心提到了最高处，因为下一步就是调整激光器的参数、验证染料选择是否正确的时候。由于没有直接对应的激光器，我们选择了临近的640 nm激光器。可是，视野中只出现了星星点点的颜色，非常少，这和预期结果差距太多。难道实验就这样宣布失败了吗？由于是第一次使用，我还可以求助老师。老师赶来仔细询问了染料的参数，帮助我对仪器参数进行了调整。老师说，染料都是有一定范围的，通过调整激发和发射波长的范围可以获取到不同量的荧光信号。老师试着调整了两个波长的范围，视野中出现了稳定而连续的荧光信号，同时没有细胞自发荧光的干扰。到此，实验就可以宣告成功了。

仪器聚焦的不仅仅是图像，而是我内心对科研的渴望。科研结果就是由这些小的结果一点点积累起来。我很开心，能够为科技进步与创新贡献微薄的力量。